全血RNA快速提取試劑盒 核酸提取
適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。全血RNA快速提取試劑盒 核酸提取
FlashPure Blood Total RNA Mini Kit
血液總 RNA 提取試劑盒（離心柱型）
全血RNA快速提取試劑盒 核酸提取
目錄號：91016
產品內容
產品成份 | 91016-50（50 次） |
10X 紅細胞裂解液 RLB | 25 ml |
裂解液 RLT | 50 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇、β-巰基乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。
產品簡介
適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。
產品特點
1. 高效：提取全過程僅需 20 min！
2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
操作步驟
提示：所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進行。
① 第一次使用前，請先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無水乙醇。
② 操作前，用RNase-Free H2O將10X紅細胞裂解液RLB稀釋到 1X。
③ 操作前，在裂解液 RLT 中加入β-巰基乙醇至終濃度 1%，如 1ml RLT中加入 10μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。配好的 RLT 4℃可放置一個月。
1. 在適合大小的 RNase free 離心管中加入 1 體積（<1.5 ml）加入各種抗凝劑新鮮血液 (顛倒混勻后)和 3 體積的紅細胞裂解液 RLB，顛倒混勻，可輕彈管壁,確保混勻。
2. 室溫放置 10 分鐘（期間應該顛倒輕彈混勻數次幫助裂解紅細胞）。
注意：如果 RNA 降解嚴重，可在冰上裂解，時間可以長一些以充分裂解。
3. 12,000 rpm 離心 20 秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清
（注意不要吸到管底的細胞團），留下完整的管底白細胞團。
注意：離心后在管底應該見到白色的白細胞團，也可能有一些紅細胞殘片和白細胞團在 一起，但是如果看到的是大部分的紅色細胞團，說明紅細胞裂解很不充分，應該再加入紅細胞裂解液，重懸后重復步驟 2，3。
注意：上清盡可能的吸棄，殘留過多會稀釋裂解液，造成裂解結合異常，產量純度降低。
4. 渦旋或者輕彈管壁將白細胞沉淀wan全松散重懸，加入 350 μl（< 0.5 ml全血）或者 600 μl（0.5~1.5ml 全血）裂解液 RLT，吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 秒，充分裂解。
注意：病人正常血樣白細胞數量為 4000-7000/μl，如果血樣中白細胞數量可能大幅增加，應該適當減少處理量。或者按照 350 μ（l < 2x106 白細胞）或者 600 μl（2x106~1x107白細胞）的比例加裂解液 RLT。
5. 用吸頭吹打混勻幫助裂解，或者劇烈渦旋震蕩，直到得到滿意勻漿結果。(或者電動勻漿30秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高產量。
6. 向裂解物中加入等體積（一般 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇，吹打混勻。
7. 每次轉移≤700 μl 混合物至一個 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，RNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。重復此過程，直到溶液全部上柱。
8. 加700μl去蛋白液RW1，室溫放置1min，13,000rpm離心 30 sec，倒棄濾液。
9. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
10. 重復步驟 9。
11. 將RNA吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上乙醇。
12. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase - free1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50 μl RNase free H2O（事先在 70-90℃水浴中加熱可提高產量）， 室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。
13. 提取的 RNA 可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。
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