多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒核酸提取
適用于快速提取各種植物根、莖、葉、花的總RNA，采用gDNA過濾器，高效濾除gDNA，得到的總RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒核酸提取
多糖多酚植物總 RNA 提取試劑盒（gDNA 過濾器）
Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit
多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒核酸提取
目錄號：91318
產品內容
產品成份 | 91318-50（50 次） |
裂解液 PRL | 50 ml |
糖酚去除劑 PAD | 5 ml |
裂解液 PRL Plus | 25 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
gDNA 過濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。
產品簡介
適用于快速提取各種植物根、莖、葉、花的總RNA，采用gDNA過濾器，高效濾除gDNA，得到的總RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。
成功案例：棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻、慈姑、葛根、甘肅桃、玫瑰花、檳榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡楊、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、紅樹根、鐵線蕨、黃瓜、小麥、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、馬尾松、蕪菁、毛果楊、木薯、大葉落地生根、山杏、旱柳、桉樹、琵琶花果、麻風樹，沙生槐、蕎麥...
產品特點
1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！
2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過程僅需 20min！
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
操作步驟
第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標簽。
提示：所有離心步驟必須在室溫（15 ~37℃）下進行。
1. 材料處理：
a．吸取500μl裂解液PRL，轉入 1.5 ml 離心管中，再加入50 μl糖酚去除劑PAD，混勻備用。
注意：糖酚去除劑PAD是提取多糖、多酚、次級代謝產物多、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分。對于幼嫩的農作物葉片等簡單樣本，不加糖酚去除劑PAD，RNA的產量可能會提高一些。
b．液氮中研磨植物組織成細粉，取≤50mg細粉轉入上述裝有PRL裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩30sec，充分混勻。
冬天氣溫低，37℃搖床放置3min，可增強裂解效果，提高產量
c．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
注意：使用1ml裂解液PRL和100μl糖酚去除劑去裂解100mg樣品，RNA產量會翻倍。
2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉入一個新的 1.5 ml離心管，加入0.5倍體積（一般240μl）的無水乙醇, 吹打混勻。
3. 每次轉移≤750μl上清混合液至gDNA過濾器中，13,000rpm離心2 min，倒棄濾液。此時，絕大部分gDNA被濾除，RNA和少量gDNA殘留被吸附在膜上，重復此過程，直到混合液全部轉入gDNA過濾器。
4. 取出步驟3的gDNA過濾器，放入一個新的2ml離心管中，加入500μl裂解液PRL Plus，13,000rpm離心1min，收集濾液（RNA在濾液中），向濾液中加入250μl無水乙醇，吹打混勻。
5. 將濾液混合物加入RNA吸附柱中，13,000rpm離心2 min，此時，RNA被吸附在膜上，倒棄濾液。
6. 加入700μl去蛋白液RW1，室溫放置1min，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。
7. 加入500μl漂洗液RW，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。
8. 重復步驟 7。
9. 將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2 min，除去膜上殘留的乙醇。
10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free1.5ml離心管中，向RNA吸附膜的中央懸空滴加30~50μl的RNase-free H2O，室溫放置1min，13,000rpm離心 1min。
11. 提取的總RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。
附錄：
一、液氮研磨（自動研磨儀）:
a. 在2.0 ml液氮研磨管中放入3 mm鋼珠3粒，放進≤50mg樣本，投入液氮中預冷。把研磨模塊也丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。
b. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置55個頻率，震蕩30~60sec。（以北京赫得京N9548為例）
c. 研磨完成后，馬上加500μl裂解液PRL和50μl糖分去除劑PAD，劇烈渦旋30sec。
d. 將裂解物13,000rpm離心5~10min，沉淀不能裂解的碎片。
二、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在2.0ml液氮研磨管中加入5mm鋼珠1粒，加1ml裂解液PRL和100μl PAD，放進≤100mg樣本，設置60個頻率，震蕩2min。
b. 將裂解物13,000rpm 離心5~10min，沉淀不能裂解的碎片。
相關產品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒核酸提取
