細胞轉(zhuǎn)入細胞無血清培養(yǎng)基養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程
更新時間：2022-12-14 點擊次數(shù)：1564次
血清仍是動物細胞培養(yǎng)中最基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。
細胞轉(zhuǎn)入細胞無血清培養(yǎng)基養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。
在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。
在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
為了使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)，關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細胞：
1.處于對數(shù)生長中期
2.>90% 活細胞率
3.適應(yīng)時以較高的起始細胞接種
細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法
1.直接適應(yīng)——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。
一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng)，接種細胞密度應(yīng)該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當(dāng)細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當(dāng)細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時，細胞適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當(dāng)細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?br />
(1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25%SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。
(2)當(dāng)細胞密度>5×10細胞/ml時，以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
(4)當(dāng)細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天)，在99.99%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(5)每隔3到5天，當(dāng)細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
