LONZA 4D-Nucleofector LV 大規模流式細胞核轉染系統
——人T細胞大規模高效轉染
動物細胞轉染技術多樣，包括化學法、病毒轉導、傳統電穿孔法等。
化學轉染磷酸鈣沉淀法、DEAE-葡聚糖、脂質體轉染等，操作簡單快捷，但大部分原代細胞、干細胞、細胞系轉染效率低下，僅有少數貼壁細胞系轉染較高效，批次間重復性差。
使用慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒的病毒轉導技術，雖然轉染效率高，但轉染底物有局限，轉染的基因片段大小需<10kb。且經濟成本相當高昂，需要提前包裝病毒，實驗流程繁復，耗時1-2周。
傳統電穿孔技術，操作簡單快速，轉染基因限制少，但細胞毒性大、原代細胞成功率很低。
LONZA 4D-Nucleofector細胞核轉染系統，是在傳統電穿孔技術的基礎上，針對每一種細胞，優化電脈沖參數、轉染液，使細胞轉染效率、細胞活率得到顯著提升，解決了原代細胞、干細胞、T細胞等使用電穿孔轉染效率低下的問題。同時，4D-Nucleofector可讓外源基因直接穿過核膜進入細胞核，不依賴細胞有絲，實現2小時快速表達。
LONZA全qiu共享數據庫，包含超過1500種原代細胞、細胞系的轉染數據，提供包括細胞來源、傳代、培養條件、培養基、到轉染后培養技巧的成熟流程，讓研究者在海量數據支持中快速開展實驗，并取得成功。操作4D-Nucleofector核轉染系統時，只需一鍵調用LONZA內置的轉染程序，即可實現細胞快速、高效轉染，而無需自行摸索轉染條件。
LONZA 4D-Nucleofector LV大規模流式細胞核轉染系統，可提供單次zui高2×10^9個細胞、封閉、無菌的高效轉染，在人T細胞、CHO懸浮細胞、HEK23懸浮細胞、K562細胞等超過700種細胞中大量應用。
1、封閉、無菌的系統和耗材設計，滿足細胞治療基礎研究需求。
2、規模可簡單放大，在4D-Nucleofector X模塊上進行的2×10^4細胞數量的優化轉染方案，可直接在LV上使用。
3、符合cGMP要求，可使用符合美國FDA21 CFR part 11、歐盟Annex 11的軟件進行控制，適用于嚴格監管的GMP實驗室。
①用戶管理（登陸，不同級別）
②具有用戶姓名與時間標記的電子簽名
③任何記錄的修改或是數據的創建均被記錄在案
④結果報告：失敗報告，以及詳細的問題描述
⑤可根據21CFR part11的要求導出數據（加密，預防）
⑥審計追蹤（使用記錄、更改記錄）
⑦無數據刪除可能
4、操作靈活，提供單次1mL（最多1×10^8個細胞）的手動加樣、20×1mL（最多2×10^9個細胞）的自動加樣，快速高效。
分別用4D-Nucleofector細胞核轉儀X模塊（100μL）、LV模塊（1mL）向包括人T細胞、PBMC、293細胞、CHO細胞在內多種代表性細胞中轉染pmaxGFP載體，實現轉染規模的線性放大。
LONZA 4D-Nucleofector LV大規模流式細胞核轉染系統，基因治療基礎研究的不二工具。
1、作為非病毒轉染技術，適用于不同的基因編輯系統，如鋅指核酸酶(ZFN)、轉錄激活因子樣效應物核酸酶（TALEN）、CRISPR/Cas系統。
2、可轉染多種不同的底物，如DNA、mRNA、蛋白（如Cas9 RNP），由于轉染條件相同，可進行不同底物的簡單共轉染。
3、常用于應用iPS、CD34+造血干細胞、T細胞的穩定修飾。
4、技術成熟可靠，有≥80本相關出版物刊載，眾多領域的zhi名學者正在使用4D-Nucleofector技術，quan球發表文章超過10,000篇，并持續不斷增加中！
LONZA 4D-Nucleofector大規模流式核轉染系統，作為轉染人原代T細胞的強大方法，與CRISPR和其他基因編輯技術的聯合應用，已成為基因治療基礎研究的理想工具。
參考文獻
1.Closed-system transposon-mediated manufacture of GMP grade CAR T-cells via the Lonza Nucleofector LV XL. LM Brownrigg,et al. ELSERIER(2020)
2.Biomimetic mineralized collagen scaffolds and their effect on osteogenic differentiation. L Luo,et al. ELSERIER(2020)
3.Optimization of clarification process for viral vectors. B Raghavan,et al. ELSERIER(2020)
4.Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer. Mayela Mendt,et al. JCI Insight(2018)
5.Off the shelf T cell therapies for hematologic malignancies. BJ McCreedy,et al. ELSERIER(2018)
6.Unlocking the Potential of CRISPR-Based Gene Editing. Andrea Toell. Genetic Engineering & Biotechnology News(2017)
